台盼蓝染色试验道理
台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料,经常应用于检测细胞膜的完全性,还经常应用于检测细胞是否存活.活细胞不会被染成蓝色,而逝世细胞会被染成淡蓝色.分子式：C34H24N6O14S4Na4,分子量: 960.82,可溶于水（10mg/ml).
试验道理：正常的活细胞,胞膜构造完全,可以或许排挤台盼蓝,使之不克不及够进入胞内;而损掉活性或细胞膜不完全的细胞,胞膜的通透性增长,可被台盼蓝染成蓝色.平日以为细胞膜完全性损掉,即可以为细胞已经逝世亡.是以,借助台盼蓝染色可以异常轻便.快速地区分活细胞和逝世细胞.台盼蓝是组织和细胞造就中最经常应用的逝世细胞判定染色办法之一.留意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象.台盼蓝染色后,经由过程显微镜下直接计数或显微镜下摄影后计数,就可以对细胞存活率进行比较准确的定量.台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操纵异常简略.
试验步调：
1.配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4℃保管.应用时用PBS稀释至0.4%.
2.胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作恰当稀释.
3.染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混杂混匀.（终浓度0.04%）
4.计数：在3分钟内,分离计数活细胞和逝世细胞.
5.镜下不雅察,逝世细胞被染成显著的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状.
6.统计细胞活气：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+逝世细胞总数）×100%
留意：
1.保管前提：室温保管.
2.有潜在致癌安全,试验时穿试验服并戴一次性手套和口罩操纵.
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