台盼蓝染色试验原理和步骤

时间:22-11-24 网友

精心整理台盼蓝染色实验原理

台盼蓝(TrypanBlue)是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。分子式:CHNOSNa,分子量:960.82,可溶于水(10mg/ml)。 461443424实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。

实验步骤:、配4台盼母:称4台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,双蒸100m用滤纸过滤℃保存。使用时PB稀释0.4

、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释

、染色:细胞悬液0.4台盼蓝溶液9:混合混匀。(终浓0.04

、计数:分钟内,分别计数活细胞和死细胞

精心整理.

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活细胞拒染呈无色透明状。5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而死细胞总数)(活细胞总数+/%6、统计细胞活力:活细胞率()=活细胞总数 ×100% 注意: 1.保存条件:室温保存。 有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。2. 精心整理.

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