Double Digestion(双酶切反应)时Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表
■ 说明
使用二种酶同时进行DNA切断反应 (Double Digestion) 时，为了节省反应时间，通常希望在同一反应体系内进行。Takara采用Universal Buffer表示系统，并对每种酶表示了在各Universal Buffer中的相对活性。尽管如此，在进行Double Digestion时，有时还会难以找到合适的Universal Buffer。
本表以在pUC系列载体的多克隆位点处的各限制酶为核心，显示了在Double Digestion可使用的最佳Universal Buffer条件。在本表中，各Universal Buffer之前表示的 [数字×] 是指各Universal Buffer的反应体系中的最终浓度。Takara销售产品中添附的Universal Buffer全为10倍浓度的缓冲液。终浓度为0.5×时反应体系中的缓冲液则稀释至20倍，1×时稀释至10倍，2×时稀释至5倍进行使用。
■ 注意
◇ 1 μg DNA中添加10 U的限制酶，在50 μl的反应体系中，37℃下反应1小时可以完全降解DNA。
◇ 为防止Star活性的产生，请将反应体系中的甘油含量，尽量控制在10%以下。
◇ 根据DNA的种类，各DNA的立体结构的差别，或当限制酶识别位点邻接时，有时会发生Double Digestion不能顺利进行的可能。
Enzyme
Acc I
BamH I
BglII
Cla I
EcoR I
EcoR V
Hinc II
Hind III
Kpn I
Nco I
Nde I
Acc I
－
0.5×K
1×T
1×M
1×M
0.5×K
1×M
1×M
1×M
1×M
+BSA
1×T
BamH I
0.5×K
－
1×K
1×K
1×K
1×K
0.5×K
1×K
0.5×K
1×K
+BSA
1×K
Bgl II
1×T
1×K
－
1×H
1×H
1×H
2×K
1×K
1×T
1×K
+BSA
1×H
Cla I
1×M
1×K
1×H
－
1×H
1×H
1×M
1×M
1×M
1×K
+BSA
1×H
EcoR I
1×M
1×K
1×H
1×H
－
1×H
1×M
1×M
1×M
1×K
+BSA
1×H
EcoR V
0.5×K
1×K
1×H
1×H
1×H
－
2×T
1×K
0.5×K
1×K
+BSA
1×H
Hinc II
1×M
0.5×K
2×K
1×M
1×M
2×T
－
1×M
1×M
1×M
+BSA
1×T
Hind III
1×M
1×K
1×K
1×M
1×M
1×K
1×M
－
1×M
1×K
+BSA
1×K
Kpn I
1×M
0.5×K
1×T
1×M
1×M
0.5×K
1×M
1×M
－
0.5×K
+BSA
1×T
Nco I
1×M
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×M
+BSA
1×K
+BSA
0.5×K
+BSA
－
1×K
+BSA
Nde I
1×T
1×K
1×H
1×H
1×H
1×H
1×T
1×K
1×T
1×K
+BSA
－
Not I
0.5×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1×H
+BSA
1×H
+BSA
1×H
+BSA
1×H
+BSA
0.5×K
+BSA
0.5×K
+BSA
0.5×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1×H
+BSA
Pst I
1×M
1×K
1×H
1×H
1×H
1×H
1×M
1×M
1×M
1×K
+BSA
1×H
Pvu I
0.5×K
1×K
1×K
1×K
1×K
1×K
0.5×K
1×K
0.5×K
1×K
+BSA
1×K
Sac I
1×M
0.5×K
0.5×K
1×M
1×M
0.5×K
1×M
1×M
1×L
0.5×K
+BSA
1×T
Sal I
1.5×T
1.5×T
1×H
1×H
1×H
1×H
1.5×K
1.5×K
1.5×T
+BSA
1.5×T
+BSA
1×H
Sma I
1×T
+BSA
0.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
0.5×K
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
Spe I
1×M
1×K
1×H
1×M
1×H
1×H
1×M
1×M
1×M
1×K
+BSA
1×H
Sph I
0.5×K
1×K
1×H
1×H
1×H
1×H
2×T
1×K
0.5×K
1×K
+BSA
1×H
Xba I
1×M
0.5×K
2×T
1×M
1×M
2×T
1×M
1×M
1×M
1×M
+BSA
1×T
Xho I
1×M
1×K
1×H
1×H
1×H
1×H
1×M
1×M
1×M
1×K
+BSA
1×H
Enzyme
Not I
Pst I
Pvu I
Sac I
Sal I
Sma I
Spe I
Sph I
Xba I
Xho I
Acc I
0.5×K
+BSA
1×M
0.5×K
1×M
1.5×T
1×T
+BSA
1×M
0.5×K
1×M
1×M
BamH I
0.5×K
+BSA
1×K
1×K
0.5×K
1.5×T
0.5×T
+BSA
1×K
1×K
0.5×K
1×K
Bgl II
1×K
+BSA
1×H
1×K
0.5×K
1×H
1×T
+BSA
1×H
1×H
2×T
1×H
Cla I
1×K
+BSA
1×H
1×K
1×M
1×H
1×T
+BSA
1×M
1×H
1×M
1×H
EcoR I
1×K
+BSA
1×H
1×K
1×M
1×H
1×T
+BSA
1×H
1×H
1×M
1×H
EcoR V
1×K
+BSA
1×H
1×K
0.5×K
1×H
0.5×K
+BSA
1×H
1×H
2×T
1×H
Hinc II
0.5×K
+BSA
1×M
0.5×K
1×M
1.5×K
1×T
+BSA
1×M
2×T
1×M
1×M
Hind III
0.5×K
+BSA
1×M
1×K
1×M
1.5×K
1×T
+BSA
1×M
1×K
1×M
1×M
Kpn I
0.5×K
+BSA
1×M
0.5×K
1×L
1.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×M
0.5×K
1×M
1×M
Nco I
0.5×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×M
+BSA
1×K
+BSA
Nde I
1×H
+BSA
1×H
1×K
1×T
1×H
1×T
+BSA
1×H
1×H
1×T
1×H
Not I
－
1×H
+BSA
2×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1×H
+BSA
0.5×T
+BSA
1×H
+BSA
1×H
+BSA
0.5×K
+BSA
1×H
+BSA
Pst I
1×H
+BSA
－
1×K
1×M
1×H
0.5×T
+BSA
1×H
1×H
1×M
1×H
Pvu I
2×K
+BSA
1×K
－
0.5×K
1.5×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
1×K
0.5×K
1×K
Sac I
0.5×K
+BSA
1×M
0.5×K
－
1.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×M
0.5×K
1×M
1×M
Sal I
1×H
+BSA
1×H
1.5×K
+BSA
1.5×T
+BSA
－
1.5×T
+BSA
1×H
1×H
1.5×T
1×H
Sma I
0.5×T
+BSA
0.5×T
+BSA
1×K
+BSA
1×T
+BSA
1.5×T
+BSA
－
1×T
+BSA
0.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
Spe I
1×H
+BSA
1×H
1×K
1×M
1×H
1×T
+BSA
－
1×H
1×M
1×H
Sph I
1×H
+BSA
1×H
1×K
0.5×K
1×H
0.5×T
+BSA
1×H
－
2×T
1×H
Xba I
0.5×K
+BSA
1×M
0.5×K
1×M
1.5×T
1×T
+BSA
1×M
2×T
－
1×M
Xho I
1×H
+BSA
1×H
1×K
1×M
1×H
1×T
+BSA
1×H
1×H
1×M
－
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双酶切(1)10-25
